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強筋健骨膠囊對AA大鼠的安全性研究
來源:陜西省中醫藥研究院 作者:謝人明 范引科 張紅  發表時間:2012/8/15 14:38:51  瀏覽: 2747

謝人明1 范引科1 張紅1(陜西省中醫藥研究院 710003)
劉興旺2  丁美海2  楊軍濤2  (西安安得藥業有限責任公司710075)
[摘要]  目的:探討強筋健骨膠囊對AA大鼠肝腎功能、血脂代謝、蛋白代謝的影響。方法:選擇120只雄性SD大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、夏天無膠囊組、白芍總苷(TGP)膠囊組、甲氨蝶呤(MTX)組、強筋健骨膠囊高、中、低劑量組,每組15只。除正常對照組外其余各組大鼠右后足趾皮內注射0.1ml FCA致炎并誘發大鼠佐劑關節炎,對照組大鼠注射同等劑量的生理鹽水。按給藥方案各干預組造模前預防性給藥4d,造模后給藥治療21d,每天測實驗動物體質量,試驗結束后解剖實驗動物分離重要臟器,計算各臟器指數;經頸總動脈取血,測定血清中ALT、AST、T-Bil、ALP,UREA、CREA等指標,探討強筋健骨膠囊對肝、腎功能的影響;測定血清中TP、ALB、GLO、ALB/GLO等指標,探討強筋健骨膠囊對蛋白代謝的影響;測定T-chol、TG、HDL-TC、LDL-TC及LDL-TC/ HDL-TC等指標,探討強筋健骨膠囊對血脂代謝的影響。結果:強筋健骨膠囊不影響實驗動物體質量,MTX可顯著降低實驗動物體質量(p<0.01);與空白對照組比,強筋健骨膠囊各臟器指數無顯著變化,并可修復佐劑性關節炎的臟器變化, 對肝腎功能各指標無顯著影響。結論:強筋健骨膠囊對佐劑性關節炎肝腎功能、血脂代謝、蛋白代謝等無影響,在治療風濕類疾病不但療效確切,而且安全性高。
[關鍵詞]    強筋健骨膠囊    安全性研究    佐劑性關節炎  肝腎功能  血脂代謝  蛋白代謝
近幾年來,中藥制劑對類風濕性關節炎的治療體現出較好的臨床效果,但隨之而來的是用藥安全的問題。強筋健骨膠囊具有祛風除濕,強筋壯骨的功效,臨床用于類風濕性關節炎等疾病的治療取得了較好療效,現以佐劑性關節炎(rheumatiod arthritis, AA)大鼠為實驗動物,分析研究強筋健骨膠囊的安全性。
1  實驗材料
1.1       實驗動物 
清潔級雄性Sprague-DawIey(SD)大鼠120只,購于第四軍醫大學實驗動物中心,許可證號:SCXK-(軍)-2007-007,體質量160~180g,正常飼養。
1.2 試驗藥  
強筋健骨膠囊(國藥準字 Z20050802,西安阿房宮藥業有限公司生產,組方藥物有制川烏、制草烏、制馬錢子、制半夏、制天南星、石斛、川牛膝、黨參、木瓜、鉤藤、續斷、陳皮、百草霜、礞石);白芍總苷膠囊(TGP,國藥準字 H20055058,寧波立華制藥有限公司生產);夏天無膠囊(國藥準字 Z20080112,赤峰市天奇制藥有限公司生產);甲氨喋呤片(MTX,國藥準字 H31020644,上海信誼藥廠有限公司生產);弗氏完全佐劑(FCA,美國Sigma公司)。
1.3  實驗儀器  數顯游標卡尺(精密度 0.01mm)。
實驗方法
2.1  實驗分組及給藥劑量 
將120只雄性SD大鼠隨機分為8組,每組15只。空白對照組(NS);模型組;白芍總苷膠囊(TGP)組(0.90g·kg-1·d-1);夏天無膠囊組(2.1g·kg-1·d-1);甲氨蝶呤(MTX)組(0.5mg·kg-1·d-1);強筋健骨膠囊高(1.8g·kg-1·d-1)、中(0.90g·kg-1·d-1)、低(0.45g·kg-1·d-1)劑量組。
2.2  大鼠AA模型的建立及給藥
除NS組外其余各組大鼠右后足趾肉墊皮內注射0.1mlFCA致炎[1],NS組大鼠注射同等劑量的生理鹽水。實驗開始時,每天稱量各實驗動物的體質量,按照表1劑量灌胃給藥,NS組、模型組每日給予生理鹽水灌胃,各組大鼠造模前先預防性給藥4d,造模后繼續給藥21d。
2.3  重要指標的測定
造模第21d給藥后禁食12h,第22d全部動物以10%烏拉坦1.0g/kg腹腔注射麻醉,頸總動脈采集全血3~5ml,靜置30min,3000r/min離心10min,吸取上部血清,-80℃保存。采用ELISA法檢測血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬酸氨基轉移酶(AST)、AST/ALT、總膽紅素(T-Bil)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、ALB/GLO、總膽固醇(T-Chol)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-TC)、低密度脂蛋白(LDL-TC)、LDL-TC/HDL-TC、血糖(Glu)、磷酸肌酸激酶(CK)等指標含量,用以衡量強筋健骨膠囊對肝腎功能、血脂代謝、蛋白代謝、能量代謝的影響。
2.5  重要臟器指數的測量
造模第21d給藥后禁食12h,第22d全部動物以10%烏拉坦1.0g/kg腹腔注射麻醉,剖離各臟器指數并稱重,計算臟器指數[臟器指數=100×臟器重量(g)/體重(g)] 。
2.6  數據處理
應用SPSS13.0軟件進行統計分析,結果均以 ±s表示,組間比較進行t檢驗,以p<0.05為有顯著性差異。
結果
3.1  強筋健骨膠囊對AA大鼠體質量的影響
AA大鼠體質量有下降趨勢,但無統計學意義。強筋健骨膠囊對體質量無顯著影響,MTX可顯著降低實驗動物體質量(p<0.01)。見表1:
表1 強筋健骨膠囊對大鼠佐劑性關節炎體質量的影響( ±s)
分組
動物
劑量(g/kg)
給藥前體重
給藥后體重
d6
d12
d18
d22
空白對照組
15
 
178.4±21.6
218.1±15.2 ◆◆
259.1±22.4 ◆◆
280.8±29.6 ◆◆
289.3±31.5 ◆◆
模型組
15
 
177.8±11.7
217.7±15.9 ◆◆
249.5±21.0 ◆◆
262.8±35.2 ◆◆
266.9±25.4 ◆◆
強筋健骨膠囊
15
0.45
176.6±14.7
210.2±18.2 ◆◆
243.8±23.9 ◆◆
272.2±27.0 ◆◆
275.2±27.9 ◆◆
強筋健骨膠囊
15
0.9
182.2±19.9
211.0±23.3 ◆◆
246.2±35.5 ◆◆
269.9±42.6 ◆◆
277.6±43.8 ◆◆
強筋健骨膠囊
15
1.8
182.8±11.6
205.9±16.2 ◆◆
247.0±21.1 ◆◆
249.0±24.9 ◆◆
259.6±26.6 ◆◆
夏天無膠囊組
15
2.1
183.4±16.3
211.6±14.3 ◆◆
242.0±16.1 ◆◆
271.8±18.8 ◆◆
262.8±20.8 ◆◆
TGP組
15
0.9
184.4±16.6
210.7±21.2 ◆◆
239.0±25.9 ◆◆
266.5±30.3 ◆◆
265.3±32.7 ◆◆
MTX組
15
0.005
179.8±15.2
145.8±9.6△△**▲▲★★
165.1±15.3△△**▲▲★★
191.9±23.7△△**▲▲★★
183.5±28.8△△**▲▲★★
注:組間進行t檢驗,與空白對照組比較p<0.05,△△p<0.01;與模型組比較*p<0.05,**p<0.01;與夏天無組比較p<0.05, ▲▲p<0.01;與TGP組比較p<0.05, ★★p<0.01;與MTX組比較p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.2  強筋健骨膠囊對AA大鼠重要臟器指數的影響
AA大鼠肝臟指數顯著降低(p<0.05),脾臟指數、肺臟指數顯著升高(p<0.05),腎臟指數有下降的趨勢;強筋健骨膠囊可顯著降低脾臟指數(p<0.05,p<0.01),有升高肺臟指數、腎臟指數的趨勢。TGP顯著升高腎臟指數(p<0.05),與對照組比,顯著升高脾臟指數(p<0.01);夏天無顯著降低肺臟指數(p<0.05);MTX顯著升高心、肝、脾、腎、腦、腎上腺、睪丸等指數(p<0.01),顯著降低附睪指數、精索前列腺指數(p<0.05),對肺臟指數、胸腺指數有升高的趨勢。見表2、表3:
表2強筋健骨膠囊對佐劑關節炎大鼠重要臟器指數的影響( ±s)
分組
劑量
(g/kg)
心臟指數
(g/100g)
肝臟指數
(g/100g)
脾臟指數
(g/100g)
肺臟指數
(g/100g)
腎臟指數
(g/100g)
腦指數
(g/100g)
空白對照組
-
0.30±0.05◆◆
2.63±0.13*◆◆
0.15±0.02*★★◆◆
0.63±0.16*
0.66±0.04◆◆
0.68±0.04 ◆◆
模型組
-
0.31±0.04◆◆
2.37±0.34★★◆◆
0.21±0.08◆◆
0.88±0.32
0.62±0.07★◆◆
0.65±0.06 ◆◆
強筋健骨膠囊
0.45
0.30±0.03◆◆
2.38±0.14△△▲▲★★◆◆
0.14±0.02**★★◆◆
0.70±0.22
0.64±0.05★◆◆
0.66±0.06 ◆◆
強筋健骨膠囊
0.90
0.31±0.04◆◆
2.57±0.31★◆◆
0.15±0.03*★★◆◆
1.23±1.30
0.63±0.07★◆◆
0.63±0.07 ◆◆
強筋健骨膠囊
1.80
0.30±0.02◆◆
2.54±0.19★◆◆
0.16±0.03*★★◆◆
0.75±0.26
0.67±0.05*◆◆
0.64±0.08 ◆◆
夏天無膠囊組
2.10
0.30±0.05◆◆
2.63±0.13*◆◆
0.15±0.02*★★◆◆
0.63±0.16*
0.66±0.04◆◆
0.68±0.04 ◆◆
TGP組
0.90
0.30±0.05◆◆
2.86±0.42**
0.22±0.04△△▲▲◆◆
0.68±0.18
0.69±0.06*◆◆
0.63±0.11 ◆◆
MTX組
0.005
0.36±0.03△△**▲▲★★
3.22±0.34△△**▲▲
0.33±0.08△△**▲▲★★
0.85±0.49
0.84±0.06△△**▲▲★★
0.93±0.15△△**▲▲★★
注:組間進行t檢驗,與對照組比較p<0.05,△△p<0.01;與模型組比較*p<0.05,**p<0.01;與夏天無組比較p<0.05, ▲▲p<0.01;與TGP組比較p<0.05, ★★p<0.01;與MTX組比較p<0.05, ◆◆p<0.01。
表3強筋健骨膠囊對佐劑關節炎大鼠重要臟器指數的影響( ±s)
分組
劑量
(g/kg)
胸腺指數
(g/100g)
腎上腺指數
(mg/100g)
睪丸指數
(g/100g)
附睪指數
(g/100g)
精索前列腺指數
(g/100g)
空白對照組
-
135.28±29.70
13.30±2.17◆◆
0.97±0.21◆◆
0.31±0.10
0.51±0.15
模型組
-
120.14±27.67
14.47±6.59
0.98±0.14◆◆
0.33±0.10
0.53±0.17
強筋健骨膠囊
0.45
125.28±25.07
14.07±3.66
0.95±0.20◆◆
0.32±0.11
0.50±0.14
強筋健骨膠囊
0.90
126.95±35.24
13.93±4.99
0.98±0.17◆◆
0.31±0.06◆◆
0.49±0.25
強筋健骨膠囊
1.80
133.02±29.97
15.47±2.15
0.97±0.16◆◆
0.28±0.04
0.57±0.16◆◆
夏天無膠囊組
2.10
109.97±33.34
13.30±2.17
0.97±0.21◆◆
0.31±0.10
0.51±0.15
TGP組
0.90
111.00±23.24
14.51±3.21
1.02±0.19◆◆
0.28±0.06
0.47±0.14
MTX組
0.005
147.42±63.03
19.17±5.29△△
1.27±0.16△△**▲▲★★
0.25±0.02*
0.38±0.10*
注:組間進行t檢驗,與空白對照組比較p<0.05,△△p<0.01;與模型組比較*p<0.05,**p<0.01;與夏天無組比較p<0.05, ▲▲p<0.01;與TGP組比較p<0.05, ★★p<0.01;與MTX組比較p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.4  強筋健骨膠囊對AA大鼠肝、腎功能的影響
AA大鼠ALT顯著降低,AST有降低趨勢,AST/ALT、T-Bil、UREA有升高趨勢;強筋健骨膠囊可顯著降低血清UREA的含量(p<0.05,p<0.01),有升高AST、ALT的趨勢;夏天無顯著降低血清ALT、ALP、UREA、CREA的含量(p<0.05,p<0.01),顯著升高AST/ALT,有降低AST的趨勢;TGP顯著升高T-Bil,顯著降低ALT、AST/ALT、UREA、CREA(p<0.05,p<0.01);MTX顯著升高ALP,顯著降低ALT、AST/ALT、UREA、CREA的含量(p<0.05,p<0.01)。見表4:
表4 強筋健骨膠囊對佐劑性關節炎大鼠血清肝、腎功能的影響( ±s)
分組
劑量(g/kg)
AST(U/L)
ALT(U/L)
AST/ALT
T-Bil(μmol/L)
ALP(U/L)
UREA(mmol/L)
CREA(μmol/L)
空白對照組
 
175.93±34.4
50.43±14.41*▲▲★★◆◆
3.74±1.21▲▲★◆
1.56±0.37★★
188.43±45.69◆◆
6.13±0.93▲▲★★◆◆
46.64±4.58▲▲★★◆◆
模型組
 
163.40±31.59
38.73±8.11▲▲
4.33±0.89
1.69±0.35★★
189.07±28.94◆◆
6.71±1.35▲▲★★◆◆
45.40±6.83▲▲★★◆◆
強筋健骨膠囊
0.45
177.47±27.71
41.07±8.34▲▲◆◆
4.42±0.77
1.67±0.16★★
175.07±30.47◆◆
4.43±0.75△△**
39.20±2.86△△*★◆◆
強筋健骨膠囊
0.9
173.71±54.75
38.36±11.01
4.52±0.70
1.48±0.54★★
178.14±34.81◆◆
5.42±1.31*▲▲
40.71±3.65△△*★★◆◆
強筋健骨膠囊
1.8
175.67±35.19
44.87±19.18
4.29±1.23
1.68±0.33★★
176.73±35.51◆◆
4.60±0.6△△**
41.53±2.7△△▲▲★★◆◆
夏天無膠囊
2.1
153.13±28.02
30.00±5.87△△**
5.24±1.20△△*
1.85±1.52★★
166.73±26.19*◆◆
4.22±0.58△△**
38.13±2.5△△**
TGP組
0.9
160.20±30.27
35.53±9.61△△
4.64±0.81
7.62±2.88△△**▲▲◆◆
182.20±31.07◆◆
4.50±0.59△△**
36.80±2.74△△**
MTX組
0.005
155.85±23.78
32.62±6.06△△
4.90±0.96
1.44±0.18★★
244.54±52.34△△**
4.98±1.02△△**
35.31±2.89△△**
注:組間進行t檢驗,與空白對照組比較p<0.05,△△p<0.01;與模型組比較*p<0.05,**p<0.01;與夏天無組比較p<0.05, ▲▲p<0.01;與TGP組比較p<0.05, ★★p<0.01;與MTX組比較p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.5  強筋健骨膠囊對佐劑性關節炎大鼠蛋白代謝的影響
AA大鼠血清ALB、ALB/GLO顯著下降(p<0.01),GLO有升高的趨勢;強筋健骨膠囊顯著降低血清GLO(p<0.01),顯著升高ALB/GLO(p<0.01),高、低劑量組顯著升高血清ALB(p<0.01);夏天無組可顯著降低血清TP、GLO(p<0.01),顯著升高ALB(p<0.05);TGP顯著升高ALB、ALB/GLO(p<0.01),顯著降低GLO(p<0.01);MTX顯著升高ALB、ALB/GLO、顯著降低GLO(p<0.05,p<0.01)。見表5:
表5   強筋健骨膠囊對佐劑性關節炎大鼠蛋白代謝的影響( ±s)相比
分組
劑量(g/kg)
TP(g/L)
ALB(g/L)
GLO(g/L)
ALB/GLO
空白對照組
 
63.78±3.49 ▲▲
30.73±1.25**▲▲
33.05±3.48▲▲
0.94±0.10**
模型組
 
63.05±3.04 ▲▲
25.97±2.67△△★★◆
37.08±2.31▲▲★★◆◆
0.71±0.09△△▲▲★★◆◆
強筋健骨膠囊
0.45
61.49±2.33 ▲▲
29.34±1.01△△**
32.15±2.22**
0.92±0.07**
強筋健骨膠囊
0.9
61.09±3.09
27.51±1.61△△★★
33.58±2.49**▲▲
0.83±0.08△△**▲▲★★◆◆
強筋健骨膠囊
1.8
64.54±3.02 ▲▲
30.21±1.30**▲▲
34.33±2.50**▲▲
0.88±0.07**
夏天無膠囊
2.1
58.61±3.73△△**
28.08±1.71△△*★★
30.53±2.51△△**
0.93±0.06**
TGP組
0.9
62.01±3.45
30.13±1.90**▲▲
31.88±2.27**
0.94±0.07**
MTX組
0.005
60.72±4.67
28.92±3.00*
31.80±4.00**
0.92±0.17**
注:組間進行t檢驗,與空白對照組比較p<0.05,△△p<0.01;與模型組比較*p<0.05,**p<0.01;與夏天無組比較p<0.05, ▲▲p<0.01;與TGP組比較p<0.05, ★★p<0.01;與MTX組比較p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.6  強筋健骨膠囊對AA大鼠血脂代謝的影響
AA大鼠T-chol 、TG、HDL-TC有降低趨勢,LDL-TC/HDL-TC又升高趨勢;強筋健骨膠囊有升高T-chol 、TG、HDL-TC的趨勢,有降低LDL-TC/HDL-TC的趨勢;夏天無顯著升高HDL-TC、顯著降低LDL-TC、LDL-TC/HDL-TC(p<0.05,p<0.01);TGP顯著降低T-Bil、TG、LDL-TC、LDL-TC/HDL-TC(p<0.05,p<0.01);MTX顯著升高T-chol、HDL-TC,顯著降低LDL-TC/HDL-TC(p<0.05)。見表6。
表6  強筋健骨膠囊對佐劑關節炎大鼠血脂代謝的影響( ±s)
分組
劑量
(g/kg)
T-Chol
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
HDL-TC
(mmol/L)
LDL-TC
(mmol/L)
LDL-TC/HDL-TC
對照組
-
1.55±0.15▲▲★★
0.93±0.28▲▲★★◆◆
1.01±0.12
0.54±0.07▲▲★★
0.54±0.09▲▲★★◆
模型組
-
1.33±0.29
0.70±0.18★◆
0.83±0.18◆◆
0.50±0.14★★
0.62±0.13▲▲★★◆◆
強筋健骨膠囊
0.45
1.56±0.17▲▲★★
0.76±0.27★★◆
1.04±0.08**★★
0.52±0.13★★
0.50±0.13*★★
強筋健骨膠囊
0.90
1.37±0.17△△★◆
0.76±0.19★★◆
0.93±0.15
0.44±0.08△△★★
0.49±0.11*★★
強筋健骨膠囊
1.80
1.57±0.20▲▲★★
0.85±0.21▲▲★★◆◆
1.08±0.16★★
0.49±0.07★★
0.45±0.07△△**★★
夏天無膠囊組
2.10
1.37±0.16△△★◆
0.64±0.14△△
0.96±0.10*
0.41±0.08△△*★★
0.43±0.08△△**★★
TGP組
0.90
1.17±0.22△△◆◆
0.54±0.19△△
0.89±0.16◆◆
0.28±0.09△△**▲▲◆◆
0.32±0.08△△**▲▲◆◆
MTX組
0.005
1.67±0.42*★★
0.56±0.14△△
1.15±0.30**★★
0.52±0.14★★
0.46±0.08**★★
注:組間進行t檢驗,與空白對照組比較p<0.05,△△p<0.01;與模型組比較*p<0.05,**p<0.01;與夏天無組比較p<0.05, ▲▲p<0.01;與TGP組比較p<0.05, ★★p<0.01;與MTX組比較p<0.05, ◆◆p<0.01。
3.7  強筋健骨膠囊對AA大鼠糖代謝的影響
AA大鼠血清Glu含量顯著升高(p<0.01);MTX顯著升高Glu(p<0.01)。見表7
表7  強筋健骨膠囊對佐劑關節炎大鼠血糖、磷酸肌酸激酶的影響( ±s)
分組
劑量
(g/kg)
Glu
(mmol/L)
CK
(U/L)
對照組
-
4.01±0.54**▲▲★★◆◆
2735±1489
模型組
-
5.45±1.09△△▲▲◆◆
2113±419
強筋健骨膠囊
0.45
5.15±1.41▲▲◆◆
2954±1571
強筋健骨膠囊
0.90
5.99±1.64△△
1976±1194
強筋健骨膠囊
1.80
5.05±0.90△△▲▲
2201±497
夏天無膠囊組
2.10
6.25±1.30△△
2378±594
TGP組
0.90
6.05±1.41△△
2428±540
MTX組
0.005
7.11±1.60△△**
2274±544
注:組間進行t檢驗,與空白對照組比較p<0.05,△△p<0.01;與模型組比較*p<0.05,**p<0.01;與夏天無組比較p<0.05, ▲▲p<0.01;與TGP組比較p<0.05, ★★p<0.01;與MTX組比較p<0.05, ◆◆p<0.01。
3、結論與討論
本研究結果顯示,強筋健骨膠囊可以改善AA大鼠出現的肝臟指數降低,脾臟指數、肺臟指數升高的現象。強筋健骨膠囊對AST、ALT、T-Bil、ALP、CREA等均無影響,說明強筋健骨膠囊不具有肝腎毒性。強筋健骨膠囊對血清總蛋白(TP)無影響,但可升高血清白蛋白、降低血清球蛋白,強筋健骨膠囊又升高高密度脂蛋白,降低低密度脂蛋白的作用,對血清總膽固醇與甘油三酯無顯著影響。所以,強筋健骨膠囊對肝腎功能、血脂代謝、蛋白代謝基本無影響。甲氨蝶呤可顯著降低實驗動物體質量,免疫抑制劑白芍總苷脾臟指數顯著升高,T-Bil明顯升高,對血脂代謝有明顯毒性。之前有研究發現,強筋健骨膠囊對AA鼠有明顯的治療作用,可見本藥在風濕性疾病的治療中表現出療效確切、而且安全性高,可適用于糖尿病患者,并且有預防動脈硬化的作用。
參考文獻
1  馮芳,丁志建,劉俊.佐劑性關節炎大鼠模型的實驗研究[J].天津藥學,2004,16(2):1-4.

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